基因槍的原理
基因槍法，又叫粒子轟擊細胞法或微彈技術?；驑尩淖饔檬怯脡嚎s氣體(氦或氮等) 動力產生一種冷的氣體沖擊波進入轟擊室(因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷)，把粘有DNA 的細微金粉打向細胞，穿過細胞壁、細胞膜、細胞質等層層構造到達細胞核，完成基因轉移。只有很少部分的細胞符合這樣的要求，大多數會因為力道不對而失敗，但這少部分細胞已足夠完成基因轉移操作的需要。利用氦氣、金粉的原因主要是: 密度大，穿孔容易; 口活性小，不易毒害細胞。
基因槍根據動力系統可分為火藥引爆、高壓放電和壓縮氣體驅動三類。其基本原理是通過動力系統將帶有基因的金屬顆粒（金?；蜴u粒），將DNA吸附在表面，以一定的速度射進植物細胞，由于小顆粒穿透力強，故不需除去細胞壁和細胞膜而進入基因組，從而實現穩定轉化的目的。它具有應用面廣，方法簡單，轉化時間短，轉化頻率高，實驗費用較低等優點。對于農桿菌不能感染的植物，采用該方法可打破載體法的局限?；驑尩霓D化頻率與受體種類、微彈大小、轟擊壓力、制止盤與金顆粒的距離、受體預處理、受體轟擊后培養有直接關系。
基因槍的操作方法
l．材料準備 在9cm2培養皿上鋪一薄層培養基,把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈傷組織、懸浮細胞、原生質體等)平鋪于培養皿中心,直徑在3cm范圍內.
2．金粉的處理 取60mg金粉或鎢粉置于離心管中,加入lml無水乙醇,充分振蕩3min,以9615g離心1rain,去上清,再加入lml無菌水充分混勻后,以9615g離心,重復上述步驟3次.zui后,將金粉懸浮于lml無菌蒸餾水中,置4‘c或室溫下儲存.
3．dna的處理 取50ta金粉懸浮液,依次加入5rd的質粒dna(1．0／lg～1)溶液、50／／l 0．1mol／l亞精胺(所用的溶液經無菌),振蕩3rain后,在室溫下放置10min,以9615g離心10s,棄去上清液；加入250~1無水乙醇,振蕩后以9615g離心10s,棄上清液.沉淀重新懸浮于60／1l無水乙醇中,可供5槍(每槍10~1)使用.
4．基因槍的操作 基因槍的操作均在無菌條件下進行,具體步驟如下:
1)先用70％乙醇對基因槍表面及樣品室進行.同時,用70％乙醇將阻擋網和可裂圓片,微彈載體及其固定器、固定工具浸泡15min后,放在超凈臺上晾干.可裂膜片、固定蓋、微彈載體發射裝置可用70％乙醇進行表面滅菌,吹干.
2)將微粒載片嵌入固定環中,取dna及金粉的混合物加于微粒載片中心,干燥lmin左右.
3)安裝可裂膜于其托座上,順時針擰到氣體加速器上.
4)將空間環、阻擋網、阻擋網托座、微粒載片及固定環(帶有微粒的面朝下)安裝好,旋緊蓋子,插入搶中.
5)把樣品放在轟擊室中,關好門.
6)打開氦氣瓶的總閥,順時針轉氦氣調節閥,使氦壓表指針的示數高于可裂膜壓力200psi(＝1．379mpa).
7)打開基因槍及變壓器開關.
8)按動真空鍵,待真空度至26—28in hg(＝88．05～94．82kpa)時,迅速按下hold鍵,接著按住發射鍵,并保持不動,直到激發為止.
9)按通氣鍵待真空表歸零后,取出樣品.
10)關機.把氦氣瓶的總開關旋緊,打一次空槍,把氦壓表指針歸零后,再逆時針旋轉氦壓表調節閥；關閉基因槍的總開關及變壓器開關.
基因槍的注意事項
1) 質粒dna的儲存濃度在槍擊前zui好調至1ug/ul,這樣有利于制備微粒子彈時的dna取樣.質粒dna與金粉形成復合體的比例以0．75～1pg／mg(金粉)為宜.
2) .質粒dna的純度和濃度是影響轉化率的重要參數之一.一般每槍用0．75～l／1gdna.
3). 亞精胺zui好是現用現配,或者儲存于一20~c冰箱中(時間不超過1個月).如沒有保存好或保存時間過長,亞精胺會發生降解,從而影響dna吸附于金屬微粒表面的能力
4) 對于植物材料轉化,微粒子彈載體的選擇視受體材料而定.此外,可裂圓片的規格應與微粒子彈載體對應.
伯樂BIO-RAD Helios 基因槍
Helios 基因槍是一種方便的手提式設備，可對細胞進行快速直接的原位基因轉移。該系統通過可調節的氦氣脈沖，
來帶動位于小塑料管內壁，包被有 DNA、RNA 或其它生物材料的金粉顆粒，將其直接打入細胞內部。使用樣品管制備站可很容易地制備管內子彈。
主要功能
簡單、快速、功能靈活的基因傳送，各種細胞通用
適用于瞬時表達和穩定表達
只需少量的 DNA 和細胞，無需載體 DNA
能進行多質粒共同導入
可輸送大片段 DNA
胞內目標基因可導入多個細胞
用于體內和體外轉化
沒有無關的基因或蛋白被轉導
伯樂BIO-RAD Helios 基因槍訂購信息：
1652411 Helios Gene Gun Kit, 100/120 V, includes Helios gene gun, 5 O-rings, 5 barrel liners, 5 white cartridge holders, cartridge extractor tool, 9 V battery.
1652431 Helios Gene Gun System,100/120 V, handheld biolistic system, includes helium hose assembly with regulator, tubing prep station (#165-2418), syringe kit, Tefzel tubing, tubing cutter, optimization kit (#165-2424).
1652451 Helios Gene Gun Low-Pressure System,100/120 V, handheld biolistic system, includes helium hose assembly with low-pressure regulator, tubing prep station (#165-2418), syringe kit, tubing cutter, optimization kit (#165-2424).
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