經常有同學咨詢,看到文獻里面很多熒光蛋白的照片非常漂亮,不知道怎么拍攝,上海峰志儀器有限公司的技術工程師將熒光蛋白表達的拍攝方法給大家說一下,供大家參考。
上圖:紅色熒光蛋白在愈傷上的表達
熒光蛋白表達的拍攝工具:
光源:光源用于激發熒光蛋白發出熒光,如果視野很大,建議購買LUYOR-3415系列GFP激發光源,這款照射面積大,激發熒光亮度高,拍攝效果非常好。
單反相機:常規的單反相機均可。
拍照濾鏡:根據拍攝的熒光蛋白種類,要選擇合適的熒光蛋白拍照濾鏡,拍照濾鏡是將激發光源的激發光過濾掉,讓熒光蛋白的熒光通過,這樣單反相機就能呈現精美的熒光照片。
暗室:因環境明亮光線,影響大熒光的拍攝,拍攝周圍光線越暗,拍攝效果約好,如果沒有暗室,可以選擇夜晚拍攝。
熒光蛋白表達的拍攝技巧:
將單反相機檔位撥到手動檔位(M檔),調整光圈、ISO、和快門速度三個參數到合適值。
將選擇好的熒光蛋白拍照濾鏡安裝到單反相機鏡頭上。
將LUYOR-3415系列GFP激發光源安裝到臺式支架上,打開光源開關。
調整合適角度,相機對焦到拍攝目標上,拍攝即可。
說明:
如果是拍攝葉片上的GFP或eGFP的表達,葉片上的葉綠素在450nm激發光照射下會發出強烈的紅色熒光,如果GFP或eGFP的表達量不高的話,會拍攝不到熒光蛋白的表達,這時候建議不用LUV-495A拍照濾鏡,用LUV-520A綠色濾鏡拍攝,LUV-520A綠色濾鏡只允許綠色波段通過,葉綠素熒光被隔離掉了。