熒光顯微鏡常用的激發光源

熒光顯微鏡常用LED激發光源特點

相對于一般的顯微鏡，熒光顯微鏡保留著顯微鏡功能的同時，還能進行熒光觀察，具有檢出能力強，能進行多重著色觀察的特點，廣泛應用于生物醫學領域。而熒光照明光源是熒光顯微鏡的關鍵部件，作用至關重要，既要考慮檢測樣本標記的熒光探針吸收光譜，同時又要考慮儀器的使用簡便性。

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在LED前，熒光顯微鏡常用光源為高壓汞燈，在LED激發光源普遍后，就成為熒光顯微鏡的主要光源。LED發射的單色光位于相對較窄的光譜帶中，半高寬約為10nm-40nm，相對于高壓汞燈，LED激發光源有幾個重要優勢：

1）額定使用壽命可達3000小時以上，遠遠超過其他光源；

2）整個額定使用壽命期間，其輸出強度保持相對穩定，確保高效激發；

3）LED啟動和關閉時間短，即開即用，不需要預熱；

4）LED光效高，且亮度連續可調；

5）體積小、輕便，且為冷光源，彌補汞燈的大功率、發熱、使用復雜燈問題，大大的降低了熒光顯微鏡使用成本并提高熒光顯微鏡操作的簡便性。

對于熒光顯微鏡來說，尤其是單色激發的熒光顯微鏡，LED具有非常大的吸引力，例如B波段激發的熒光探針FLTC/GFP標記的樣板，在藍光LED激發下了可以獲得非常好的圖像，而廣泛應用于免疫熒光檢測領域。上海峰志多波段LED顯微鏡熒光激發光源，多波段LED光源可選，并可控制每一個LED的亮度，可以實現多波長的選擇激發，便捷、高效。

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熒光顯微鏡分析中常用激發光源的種類

在熒光分析中常用汞燈作激發光源，根據汞蒸氣壓的不同可分為：

低壓汞燈

汞蒸氣，可發射出很強波長的射線，壽命很長，可長時間連續工作，射線對眼睛有害，不眼睛時不可長時間注視。

高壓汞燈

高壓汞燈又叫高強度紫外線燈，汞蒸氣為1-數個大氣壓，可見炮區的譜線增強，在紫外光區，波長為365nm的光線zui強。

中壓汞燈

可以發射一系列汞線組成的不連續光譜，除254nm波長以外，多數譜線都可作為校正波長使用。此外，還有超高壓汞燈、汞-氙燈、汞-鋅燈等。

氫灑和氘燈

是燈泡中加氫蒸氣，經閉合放電產生160-350nm波長的光，氫朋激發態返回的基態時，就發射了氫的連續光譜，在160nm以下為線樂譜，氫燈和氘燈性能相同，其壽命也比氫燈長，因玻璃吸收紫外

線，故燈殼要用石英制作，或在燈泡出光處開一石英窗，此光源適用于紫外光區的測定。

氙燈

紫外線燈的光的輻射能強度很高，它可在220-1100nm之間發射很強的連續光譜，可用于紫外區，可見光及近紅外區的測定，雖其輻射范圍廣，使用中在生產高熱的同晨有臭氧味，其壽命短，燈泡內壓較大，如日立牌650-60型熒光分光光度計，氙燈平時約有7個大氣壓，點燃后可達30個大氣壓，故使用進應注意。

1、按裝緊固螺絲時用力應均勻，勿成扭力，以免燈泡破裂爆炸。

2、勿用手觸及燈泡，以防受熱不均破裂。

3、如紫外線燈泡有油污，應用雞皮藮酒精輕擦，不能用布、棉花等物擦拭。

熒光顯微鏡激發熒光的方式有哪些

熒光顯微鏡是科研、病理、檢驗等部門常用的醫用光學儀器之一。因為普通的顯微鏡是在明亮的背景上觀察暗物，而熒光顯微鏡是在暗背景下觀察彩色的圖像，因此它比普通的顯微鏡分辨力提高100倍，可以觀察到普通顯微鏡看不到的細節。但是它的調整，校正難度較高，只要解決了熒光顯微鏡的問題，其它顯微鏡問題就迎刃而解。

激發光源是熒光顯微鏡主要組成部分，熒光顯微鏡都采用200W的超高壓汞燈作激發光源。它是由石英玻璃制作，中間呈球形，內充有一定量的汞，工作時在兩極間放電，引起水銀蒸發，球內氣壓迅速升高，當水銀完全蒸發時，可達50～70個標準大氣壓力，這一過程一般約5～15min。超高壓汞燈的發光是電極間放電使水銀分子在不斷解離和還原過程中發射光量子的結果。它發射很強的紫光，足以激發各類熒光物質，因此被熒光顯微鏡普遍采用。

熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學的基本工具。它是由超高壓光源、濾片系統(包括激發和壓制濾板)、光學系統和攝影系統等主要部件組成，是利用一定波長的光激發標本發射熒光。

熒光顯微鏡激發熒光的方式：
按光的波長范圍分為UV激發法(使用紫外線照明法)和BV激發法(使用藍紫光)兩種。

UV激發法是用短于400nm紫外光進行激發。該法不存在可見的激發光，所以被觀察的熒光呈現該染料固有的熒光，容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。

BV激發法是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發。該方法使用藍光照射標本，所以熒光顯微鏡的截止濾光片必須使用可完全阻斷藍光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對于激發光的極大吸收波長和熒光的極大發光波長比較接近，所以BV激發法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍光作為激發光，所以熒光色素的吸收效率較高，可得到較明亮的圖像。其缺點是500nm以下的熒光無法看到，而500nm以上的使整個圖像顯黃色。在熒光抗體法中，大多以熒光色素特有的顏色來判斷其特異性，所以在討論微妙的特異性時，上述BV激發法的缺點往往影響極大。

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